本文闡述了鹵代有機(jī)物HPLC方法開(kāi)發(fā)需要注意的要點(diǎn)，這些要點(diǎn)主要是由鹵代有機(jī)物獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)決定，所以其思路可用于其他類(lèi)型儀器方法開(kāi)發(fā)過(guò)程。
一、前言 我對(duì)于寫(xiě)鹵代有機(jī)化合物的HPLC方法開(kāi)發(fā)一直心存忐忑，因?yàn)辂u代有機(jī)物實(shí)在太多了，根本不可能寫(xiě)出能涵蓋所有鹵代有機(jī)物HPLC方法開(kāi)發(fā)方方面面的內(nèi)容；幾番思量之后我覺(jué)得還是可以寫(xiě)著試試，因?yàn)楹芏帑u代有機(jī)物中鹵族元素并沒(méi)有體現(xiàn)出與HPLC相關(guān)特殊的性質(zhì)，其HPLC方法開(kāi)發(fā)同普通有機(jī)物并無(wú)區(qū)別，所以本文嘗試論述體現(xiàn)出HPLC方法開(kāi)發(fā)相關(guān)的鹵族元素特殊性質(zhì)的鹵代有機(jī)物。 二、鹵代有機(jī)物HPLC方法開(kāi)發(fā)中需要關(guān)注的特殊性質(zhì) 1.親核取代反應(yīng) 在鹵代有機(jī)物中，由于鹵原子的吸電子誘導(dǎo)效應(yīng)，成鍵電子云偏向鹵原子，與其鍵合的碳原子帶有部分正電荷，容易受到帶有負(fù)電荷或帶有孤對(duì)電子試劑的進(jìn)攻，而發(fā)生取代反應(yīng)。 親核取代反應(yīng)是要原料藥合成經(jīng)常用到的一類(lèi)反應(yīng)，如溴化有機(jī)物與有機(jī)伯胺在堿性條件下脫去溴化氫而形成有機(jī)仲胺、用酰氯給特定基團(tuán)上酰基等。溴化有機(jī)物與酰氯都有一個(gè)共同的特點(diǎn)，就是碳鹵鍵非?；顫?，即不穩(wěn)定。我們?cè)贖PLC方法開(kāi)發(fā)時(shí)需要關(guān)注其穩(wěn)定性與由此引入的雜質(zhì)。 （1）水解反應(yīng) 以酰氯為例，如在含水的稀釋劑中穩(wěn)定，則常規(guī)處理即可，如在含水稀釋劑中不穩(wěn)定，可考慮加入適量氫氧化鈉溶液全部處理成水解物或加入鹽酸減慢水解速度。一般來(lái)說(shuō)小分子烷酰氯在水中不穩(wěn)定，大分子芳香酰氯在水中較為穩(wěn)定；而小分子烷酰氯不適用于HPLC方法進(jìn)行控制，芳香酰氯一般可以考慮反相HPLC。 （2）被其他鹵素原子取代 鹵代有機(jī)物可被其他鹵素負(fù)離子取代，發(fā)生鹵素交換的反應(yīng)。 以溴化有機(jī)物為例，溴化有機(jī)物經(jīng)常見(jiàn)于原料藥合成的起始物料或中間體，在進(jìn)行HPLC方法開(kāi)發(fā)的時(shí)候除了需要關(guān)注水解外，還需要關(guān)注被其他鹵素原子的取代雜質(zhì)，如氯代產(chǎn)物，這些產(chǎn)物因極性與主成分非常接近，分離非常困難。在方法開(kāi)發(fā)時(shí)需要評(píng)估這些雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)，盡可能降低這種風(fēng)險(xiǎn)。比如稀釋劑應(yīng)避免使用鹽酸，同理應(yīng)避免供試品處理過(guò)程中引入其他鹵素原子；也應(yīng)避免在某個(gè)鹽酸鹽組分中檢測(cè)該溴化有機(jī)物的殘留，因?yàn)闀?huì)轉(zhuǎn)化為氯代產(chǎn)物，無(wú)法避免的話也應(yīng)改為研究氯代產(chǎn)物。 溴化有機(jī)物應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注氯代產(chǎn)物的分離情況，因氯原子自然界的存在過(guò)于廣泛，該類(lèi)化合物很難避免氯代產(chǎn)物的形成，如圖譜中出現(xiàn)難以分離的雜質(zhì)，應(yīng)考慮氯代產(chǎn)物存在的可能性。 2.極性 鹵代有機(jī)物與其它鹵素取代的雜質(zhì)極性非常接近，分離難度非常大，尤其是在反相色譜中，一般都是相依相偎難舍難分的好基友，情比金堅(jiān)，拆開(kāi)他們難度之大估計(jì)很多經(jīng)歷過(guò)的戰(zhàn)友們估計(jì)都是心有戚戚。這些情況需要重點(diǎn)關(guān)注，可以制定將鹵代有機(jī)物與其它鹵素取代的雜質(zhì)的分離情況作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的考察內(nèi)容。 三、典型鹵代有機(jī)物HPLC法點(diǎn)評(píng) 1.溴化有機(jī)物 以4,4'-二(2-溴乙酰基)聯(lián)苯為例，該化合物結(jié)構(gòu)式如下： 在該化合物中與溴原子相連的碳又連了一個(gè)羰基，更易發(fā)生親核取代反應(yīng)，稀釋劑中如有水可能會(huì)水解，故稀釋劑建議使用純乙腈，因該化合物極性較小，不會(huì)有溶劑效應(yīng)。注意避免引入其他鹵素原子，以免發(fā)生取代反應(yīng)生成雜質(zhì)。對(duì)于該化合物，色譜柱可使用常規(guī)C18或C8柱，流動(dòng)性可使用水-乙腈系統(tǒng)。 2.酰氯 以苯磺酰氯為例，遇水不穩(wěn)定，快速發(fā)生水解生成苯磺酸，故流動(dòng)相與稀釋劑中均不宜含水，因試劑不可能做到絕對(duì)無(wú)水，這點(diǎn)幾乎不可能做到，所以不建議檢測(cè)該化合物的原型?？梢钥紤]衍生后進(jìn)行質(zhì)量控制，如與甲醇、乙醇或水反應(yīng)生成相應(yīng)的衍生物。對(duì)于該化合物，色譜柱可使用常規(guī)C18或C8柱，流動(dòng)性可使用水-甲醇或乙腈系統(tǒng)。 四、補(bǔ)充 鹵代有機(jī)物具有基因警示結(jié)構(gòu)，如果研究其殘留，首先需要確認(rèn)是否需要按照基因毒性雜質(zhì)研究，可用derek軟件進(jìn)行預(yù)測(cè)。酰氯如果非?；顫?，理論上不可能以原型存在，可不用關(guān)注原型的殘留，只研究其可能存在的衍生殘留物。
來(lái)源： 藥事縱橫
