中國(guó)新藥雜志2020 年 第29卷第17期
國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心本文以《手性藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》為基礎(chǔ)，通過(guò)分析替格瑞洛中多個(gè)手性雜質(zhì)的研究和控制，探討多手性中心藥物的手性雜質(zhì)控制原則和策略。替格瑞洛( ticagrelor) 是一種新型、選擇性的小分子抗凝血藥物［1］，該藥物屬于新型環(huán)戊基三唑嘧啶類( cyclopentyl triazole，CPTP) 可逆性P2Y12-受體拮抗劑［2 － 3］，通過(guò)激活P2Y12-受體，可逆性地阻滯ADP 介導(dǎo)的血小板活化和聚集［4］，有效抑制動(dòng)脈粥樣化血栓的形成。臨床上用于急性冠脈綜合征( acute coronary syndromes，ACS) 患者，包括接受藥物治療和經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入( percutaneous coronaryintervention，PCI) 治療的患者，降低血栓性心血管事件的發(fā)生率。替格瑞洛片最早由瑞典阿斯利康( AstraZeneca AB) 公司研發(fā)， 2011 年在美國(guó)上市，商品名為倍琳達(dá)P2Y12( Brilinta) ，隨后在歐洲其他國(guó)家上市，在歐洲市場(chǎng)上商品名為Brilique， 2012 年11月在我國(guó)上市。國(guó)際多中心PLATO 研究( the studyof platelet inhibition and patient outcomes，PLATO) 結(jié)果顯示，替格瑞洛彌補(bǔ)了氯吡格雷抗血小板作用起效慢、個(gè)體差異性大等不足［5 － 6］。自上市以來(lái)眾多國(guó)際治療指南推薦用于ACS 患者和PCI 治療的患者。手性藥物的立體構(gòu)型與藥效學(xué)、藥動(dòng)學(xué)及毒理等密切相關(guān)，不同構(gòu)型的立體異構(gòu)體的生物活性往往有差異，主要有以下4 種情況: 2 個(gè)對(duì)映體生物活性相同，如普羅帕酮; 2 個(gè)對(duì)映體生物活性不同，但合并用藥能起到減毒作用，如抗高血壓藥物茚達(dá)立酮［7 － 8］; 對(duì)映體中一種構(gòu)型具有全部或主要的生物活性，而另一種構(gòu)型無(wú)顯著的藥理作用，如萘普生的鎮(zhèn)痛療效幾乎全部由S-構(gòu)型產(chǎn)生; 對(duì)映體中一種構(gòu)型具有良好的生物活性，而另一種構(gòu)型甚至還有毒副作用［9］，如20 世紀(jì)最嚴(yán)重藥害事件“反應(yīng)停事件”正是由( S) -沙利度胺引起的。因此手性藥物的手性雜質(zhì)控制通常是非常重要的，也是區(qū)別于其他藥物質(zhì)量研究與控制的關(guān)鍵點(diǎn)。早在1992 年美國(guó)FDA 在其關(guān)于開(kāi)發(fā)立體異構(gòu)體新藥的政策中要求在對(duì)手性藥物的各立體異構(gòu)體進(jìn)行分離［10］，對(duì)不同異構(gòu)體的藥理毒理進(jìn)行比較研究，以確定進(jìn)一步開(kāi)發(fā)的藥物。為了指導(dǎo)與規(guī)范國(guó)內(nèi)手性藥物的研發(fā)，CFDA 也于2006 年12 月發(fā)布了《手性藥物質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》［11 － 13］。替格瑞洛的結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1，化學(xué)名稱為( 1S，2S，3Ｒ，5S) -3-( 7-{ ［( 1Ｒ，2S) -2-( 3，4-二氟苯基) 環(huán)丙基］氨基} -5-( 硫丙基) -3H-( 1，2，3) 三唑( 4，5-d) 嘧啶-3-基) -5-( 2-羥基乙氧基) 環(huán)戊烷-1，2-二醇。替格瑞洛結(jié)構(gòu)中有6 個(gè)不對(duì)稱手性中心，包括替格瑞洛在內(nèi)，共可能產(chǎn)生64 個(gè)光學(xué)異構(gòu)體。其手性純度的控制是該品種的質(zhì)控難點(diǎn)。本文擬在相關(guān)指導(dǎo)原則基礎(chǔ)上，以多手性中心藥物替格瑞洛為例，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)及日常審評(píng)工作經(jīng)驗(yàn)，對(duì)多手性中心藥物的手性雜質(zhì)控制進(jìn)行討論，探討如何建立科學(xué)、合理、操作性強(qiáng)的多手性中心藥物的手性雜質(zhì)控制策略。
手性雜質(zhì)研究目標(biāo)和風(fēng)險(xiǎn)分析
手性雜質(zhì)作為有機(jī)雜質(zhì)的一種，其質(zhì)控的基本思路與有機(jī)雜質(zhì)相似，在進(jìn)行研究時(shí)，首先應(yīng)該進(jìn)行雜質(zhì)溯源的分析，確定各手性異構(gòu)體的風(fēng)險(xiǎn)程度，并制定相應(yīng)的控制策略。依據(jù)來(lái)源手性雜質(zhì)可分為工藝雜質(zhì)和降解雜質(zhì)。其中工藝雜質(zhì)包括從原料藥制備過(guò)程中引入的手性原料、手性拆分劑、反應(yīng)副產(chǎn)物等; 降解雜質(zhì)主要指原料藥不穩(wěn)定在存放過(guò)程中因構(gòu)型發(fā)生翻轉(zhuǎn)而形成的立體異構(gòu)體。不同來(lái)源的雜質(zhì)，通常需要在藥品生產(chǎn)的不同階段進(jìn)行控制。手性中心的個(gè)數(shù)也是需要考慮的問(wèn)題，對(duì)于僅含一個(gè)手性中心的藥物，一般需要在生產(chǎn)過(guò)程和終產(chǎn)品中監(jiān)控對(duì)映異構(gòu)體雜質(zhì)的含量; 而對(duì)于含多個(gè)手性中心的藥物，在終產(chǎn)品中控制多個(gè)手性雜質(zhì)通常存在困難，因此通常分階段進(jìn)行控制，還應(yīng)考慮到非對(duì)映異構(gòu)體雜質(zhì)產(chǎn)生的概率比對(duì)映異構(gòu)體更大，除監(jiān)測(cè)對(duì)映異構(gòu)體外，還應(yīng)研究和監(jiān)控非對(duì)映異構(gòu)體。替格瑞洛主要由五元環(huán)、硫醚嘧啶和三元環(huán)3個(gè)主要片段組成。目前文獻(xiàn)報(bào)道了該品種的多種合成路線，共同點(diǎn)是合成過(guò)程中均無(wú)手性中心的構(gòu)建，6 個(gè)手性中心全部由起始物料引入。本文以原研企業(yè)阿斯利有限公司在2001 年5 月公開(kāi)的替格瑞洛的改進(jìn)工藝［14］為例( 見(jiàn)圖2) ，來(lái)探討手性雜質(zhì)的引入方式及控制策略。
該合成路線先以起始物料S1 和S2 進(jìn)行偶聯(lián)，然后在亞硝酸鈉和乙酸條件下重氮化關(guān)環(huán)，再與起始物料S3 偶聯(lián)，最后脫去叉酮保護(hù)得到替格瑞洛成品。由上述合成路線可知，替格瑞洛的6 個(gè)手性中心由起始物料S1( 五元環(huán)部分) 引入4 個(gè)，由起始物料S3( 三元環(huán)部分) 引入2 個(gè)，在合成的過(guò)程中不涉及手性中心的構(gòu)建，因此光學(xué)純度的控制應(yīng)該以源頭( 起始物料) 控制為主，成品中手性雜質(zhì)控制為必要的補(bǔ)充，同時(shí)關(guān)注合成過(guò)程和穩(wěn)定性存放中是否存在構(gòu)型轉(zhuǎn)化的風(fēng)險(xiǎn)。
1． 1 起始物料S1 的立體異構(gòu)體的引入1． 1． 1 以D-核糖為合成原料的S1 合成路線圖3顯示了以D-核糖為合成原料的S1 合成路線［15］。D-核糖經(jīng)過(guò)多步官能團(tuán)轉(zhuǎn)換合成［3 + 2］偶極環(huán)加成反應(yīng)前體S1-1。隨后以DMF 為溶劑， 130 ℃加熱條件下得到環(huán)化產(chǎn)物S1-2。鈀碳?xì)浠瘲l件下斷裂碳氧鍵的同時(shí)脫除芐基保護(hù)得到化合物S1-3。隨后通過(guò)3 步反應(yīng)引入羥乙基側(cè)鏈，得到起始原料S1?；诤铣煞椒ǖ牟町?，D-核糖中可能帶有如L-核糖( 對(duì)映異構(gòu)體) 、D-阿拉伯糖( 2-差相異構(gòu)體) 等異構(gòu)體雜質(zhì)，這些雜質(zhì)可能參與后續(xù)反應(yīng)形成S1 異構(gòu)體雜質(zhì)，進(jìn)而衍生為成品異構(gòu)體雜質(zhì)。由于D-核糖異構(gòu)體參與的反應(yīng)立體選擇性較為復(fù)雜，在成品中進(jìn)行控制難度較大，因此在D-核糖中進(jìn)行異構(gòu)體的研究和控制是較為理想的選擇。通常結(jié)合具體的D-核糖的生產(chǎn)工藝對(duì)可能存在的立體異構(gòu)體進(jìn)行分析，建立適宜的分析方法對(duì)多批D-核糖的異構(gòu)體進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果及異構(gòu)體傳遞情況擬定合理的雜質(zhì)限度。
1． 1． 2 以環(huán)戊二烯烴為合成原料的S1 合成路線
圖4 顯示了以環(huán)戊二烯烴為合成原料的S1 合成路線［16］。環(huán)戊二烯與原位生成的亞硝基發(fā)生環(huán)化反應(yīng)生成雙環(huán)化合物S1-5，N 原子上引入芐氧羰基后進(jìn)行立體選擇性的雙羥基化反應(yīng)。由于立體位阻影響，生成的羥基與氮氧橋處于五元環(huán)的異側(cè)。后續(xù)經(jīng)過(guò)多步官能團(tuán)轉(zhuǎn)化，得到丙酮叉化合物S1-8。應(yīng)該說(shuō)明的是，從S1-5 至S1-8 均為外消旋化合物，且無(wú)非對(duì)映異構(gòu)體產(chǎn)生。消旋化合物S1-8 經(jīng)酒石酸進(jìn)行拆分得到單一構(gòu)型的S1。對(duì)于此種S1 合成路線，S1 中通常僅需考慮對(duì)映異構(gòu)體雜質(zhì)，可不對(duì)其非對(duì)映異構(gòu)體進(jìn)行研究。
1． 2 起始物料S3 的立體異構(gòu)體的引入起始物料S3 的合成路線見(jiàn)圖5［17 － 18］，起始物料二氟苯甲醛首先與丙二酸發(fā)生Knoevenagel 縮合得到中間體S3-2，然后與L-薄荷醇發(fā)生酯化反應(yīng)進(jìn)行順?lè)串悩?gòu)的選擇主要得到反式酯化物S3-3，再發(fā)生Corey-Chaykovsky 環(huán)丙烷化反應(yīng)得到高純度的手性化合物起始物料S3。由于Corey-Chaykovsky 環(huán)丙烷化反應(yīng)是反式共平面消除，加之手性輔基具有較大的空間位阻，理論上可以得到高純度的起始物料S3，其中含有少量的對(duì)映異構(gòu)體( 氨基與二氟苯基在三元環(huán)異側(cè)) ，而非對(duì)映異構(gòu)體( 氨基與二氟苯基在三元環(huán)同側(cè)) 生產(chǎn)的可能性較小，見(jiàn)圖6。
因起始物料結(jié)構(gòu)中存在芐位手性碳，在光照下，芐位碳原子的構(gòu)型可能發(fā)生翻轉(zhuǎn)，產(chǎn)生非對(duì)映異構(gòu)體A 和非對(duì)映異構(gòu)體B，故僅在起始物料S3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中控制S3 對(duì)映異構(gòu)體恐不足以保證最終產(chǎn)品的光學(xué)純度，一般需在終產(chǎn)品進(jìn)行補(bǔ)充研究和控制。1． 3 終產(chǎn)品中的立體異構(gòu)體風(fēng)險(xiǎn)分析根據(jù)起始物料S1( 五元環(huán)部分) 的手性中心構(gòu)建機(jī)理分析，起始物料S1 如選擇了以環(huán)戊二烯烴為合成原料或類似的路線，其中主要的手性雜質(zhì)為對(duì)映異構(gòu)體，非對(duì)映異構(gòu)體產(chǎn)生的概率較小。另一引入手性中心的起始物料S3( 三元環(huán)部分) 不僅含有對(duì)映異構(gòu)體，在物料存放及后續(xù)反應(yīng)過(guò)程中遇光易構(gòu)型轉(zhuǎn)化產(chǎn)生另外2 個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體。進(jìn)一步結(jié)合產(chǎn)品的合成路線分析，終產(chǎn)品中產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)較高的潛在的立體異構(gòu)體雜質(zhì)見(jiàn)圖7，起始物料S1( 五元環(huán)部分) 及其對(duì)映異構(gòu)體與起始物料S2 反應(yīng)生產(chǎn)中間體M2 及其對(duì)映異構(gòu)體，后續(xù)分別與起始物料S3( 三元環(huán)部分) 及其3 個(gè)異構(gòu)體反應(yīng)，共生成8 個(gè)異構(gòu)體，其中1 個(gè)為目標(biāo)產(chǎn)物，1個(gè)為對(duì)映異構(gòu)體，6個(gè)為非對(duì)映異構(gòu)體。
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的純度和其他非手性雜質(zhì)含量，積累多批次數(shù)據(jù)，在此基礎(chǔ)上擬定合理的比旋度限度，作為手性雜質(zhì)的初步控制。起始物料S1 及其對(duì)映異構(gòu)體經(jīng)下一步反應(yīng)生成具有紫外吸收的中間體M1 及其對(duì)映異構(gòu)體，且該步反應(yīng)不涉及手性中心的構(gòu)建及已有手性中心的變化，故可以在中間體M1 中采用經(jīng)驗(yàn)證可行的手性HPLC 控制中間體M1 的對(duì)映異構(gòu)體，并依據(jù)該雜質(zhì)的轉(zhuǎn)化、清除能力及多批中間體M1 的檢測(cè)結(jié)果擬定合理的限度。另外，上述控制方法的前提是不同批次間的起始物料的質(zhì)量穩(wěn)定且均一，否則也會(huì)給質(zhì)量控制帶入風(fēng)險(xiǎn)，因此起始物料供應(yīng)商的控制也是必要的。目前多數(shù)供應(yīng)商未將起始物料的生產(chǎn)納入GMP 管理，為確保供應(yīng)商能夠按照約定的工藝在良好的生產(chǎn)與質(zhì)量控制體系下生產(chǎn)出質(zhì)量符合要求的起始原料，需要對(duì)供應(yīng)商進(jìn)行較詳細(xì)、全面的質(zhì)量審計(jì)，并要求供應(yīng)商若進(jìn)行合成路線、生產(chǎn)工藝的變更應(yīng)及時(shí)通知，以便及時(shí)完成相應(yīng)的質(zhì)量研究和評(píng)價(jià)工作。綜上，基于手性雜質(zhì)產(chǎn)生機(jī)理分析的基礎(chǔ)上，結(jié)合起始物料的自身特點(diǎn)和后續(xù)反應(yīng)的轉(zhuǎn)化情況，采用分階段、粗細(xì)結(jié)合的控制方法可準(zhǔn)確、有效地控制起始物料S1 引入的手性雜質(zhì)。前面已經(jīng)討論，起始物料S3 的構(gòu)型可能產(chǎn)生翻轉(zhuǎn)，但是，這并不代表不需要在起始物料中控制手性雜質(zhì)。起始物料S3 具有環(huán)丙烷警示結(jié)構(gòu)，且在倒數(shù)第2 步參與反應(yīng)，自身殘留及潛在雜質(zhì)很容易帶入成品中，而且基于源頭和過(guò)程控制原則，應(yīng)考察起始物料S3 的構(gòu)型在生產(chǎn)過(guò)程及穩(wěn)定性存放過(guò)程中受光照影響的具體情況，如光照強(qiáng)度、光照時(shí)間及構(gòu)型轉(zhuǎn)化率等，根據(jù)研究結(jié)果及手性雜質(zhì)在后續(xù)反應(yīng)中轉(zhuǎn)化、消除能力擬定合理的限度，這種控制思路降低了成品光學(xué)純度不合格的風(fēng)險(xiǎn)，比最終僅在成品控制異構(gòu)體含量更科學(xué)、合理。在建立方法時(shí)應(yīng)注意起始物料S3 結(jié)構(gòu)中有2個(gè)氟和1 個(gè)氨基，極性大，可考慮采用手性正相色譜法以實(shí)現(xiàn)異構(gòu)體間良好的分離。起始物料S3 在光照條件下可能發(fā)生轉(zhuǎn)化，應(yīng)根據(jù)溶液穩(wěn)定性研究結(jié)果，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定是否需要避光操作。2． 3 終產(chǎn)品中異構(gòu)體的控制由上述手性雜質(zhì)產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果可知，本品可能存在7 個(gè)異構(gòu)體，僅通過(guò)在終產(chǎn)品中建立分析方法控制多個(gè)異構(gòu)體難度較大。本品的手性中心全部由起始物料引入，采用前面討論過(guò)的源頭控制，再結(jié)合生產(chǎn)過(guò)程和終產(chǎn)品的控制，才能達(dá)到全面、有效控制產(chǎn)品的光學(xué)純度的目的。若起始物料S1 引入的對(duì)映異構(gòu)體已經(jīng)在在起始物料S1 或中間體M1 中的到了充分的控制( 如控制0． 15%以下) ，終產(chǎn)品中非對(duì)映異構(gòu)體4 /5 /6 及對(duì)映異構(gòu)體之和就不會(huì)增加，在終產(chǎn)品即使不控制非對(duì)映異構(gòu)體4 /5 /6，質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)也較小?；陔s質(zhì)轉(zhuǎn)化能力和工藝清除能力的研究結(jié)果，若能使終產(chǎn)品中各對(duì)映體含量均控制在合理限度內(nèi)，也可適當(dāng)放寬起始物料S1 中對(duì)映異構(gòu)體的限度，但這種控制方法給終產(chǎn)品中異構(gòu)體分析方法的建立增大了難度。手性藥物在一定條件下，已有的手性中心的構(gòu)型也可能發(fā)生轉(zhuǎn)化，故終產(chǎn)品的光學(xué)純度的控制還需要考察后續(xù)反應(yīng)和穩(wěn)定性存放過(guò)程對(duì)已有的手性中心的構(gòu)型轉(zhuǎn)化的影響。三元環(huán)構(gòu)型可能在光照條件下發(fā)生轉(zhuǎn)化，故在起始物料S3( 三元環(huán)部分) 手性雜質(zhì)控制的基礎(chǔ)上，還需在終產(chǎn)品中控制三元環(huán)帶入或轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的非對(duì)映異構(gòu)體，即終產(chǎn)品中應(yīng)該研究非對(duì)映異構(gòu)體1 /2 /3，根據(jù)研究結(jié)果酌情訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。手性雜質(zhì)是貫穿產(chǎn)品整個(gè)生命周期的關(guān)鍵屬性，工藝研究和放大過(guò)程中根據(jù)后續(xù)反應(yīng)的機(jī)理和工藝條件，充分分析后續(xù)反應(yīng)是否會(huì)影響已有手性中心的構(gòu)型，如可能會(huì)產(chǎn)生影響時(shí)，應(yīng)研究與優(yōu)化工藝條件，盡量避免或減少構(gòu)型變化的產(chǎn)生。穩(wěn)定性考察過(guò)程中應(yīng)注意采用立體專屬性與準(zhǔn)確度等驗(yàn)證均可行的分析方法監(jiān)控各手性中心的構(gòu)型穩(wěn)定，還應(yīng)關(guān)注考察條件應(yīng)包括但不局限于現(xiàn)行穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則規(guī)定的影響因素試驗(yàn)條件、各種可能的強(qiáng)制降解試驗(yàn)條件。根據(jù)手性雜質(zhì)在各種環(huán)境因素的影響下，以及放置過(guò)程中是否穩(wěn)定，從而確定是否需在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中控制這些手性雜質(zhì)。物態(tài)( 固態(tài)和液態(tài)) 、pH 值、光、熱、空氣等因素都可能使手性藥物構(gòu)型產(chǎn)生轉(zhuǎn)化，除在手性原料藥中應(yīng)進(jìn)行全面的構(gòu)型穩(wěn)定性研究外，手性藥物制劑的異構(gòu)體控制建立在原料藥構(gòu)型穩(wěn)定性研究結(jié)果的基礎(chǔ)之上，重點(diǎn)關(guān)注可能造成構(gòu)型轉(zhuǎn)化的影響因素。根據(jù)前面的分析，替格瑞洛在光照條件下可降解產(chǎn)生非對(duì)映異構(gòu)體，因此制劑中也需要關(guān)注相應(yīng)的手性雜質(zhì)問(wèn)題。構(gòu)型穩(wěn)定性研究可在2 個(gè)階段進(jìn)行研究: ① 在處方篩選和工藝開(kāi)發(fā)研究過(guò)程中增加異構(gòu)體考察。② 在處方和工藝基本確定的階段，在影響因素、強(qiáng)降解試驗(yàn)中進(jìn)行構(gòu)型穩(wěn)定性研究，穩(wěn)定性條件可根據(jù)手性藥物的特點(diǎn)增加必要的特殊條件考察。在原料藥手性雜質(zhì)控制的基礎(chǔ)上，根據(jù)制劑構(gòu)型穩(wěn)定性研究結(jié)果，酌情制訂入手性制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。由于手性藥物具有立體結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)確定具有特殊性。同時(shí)，在非手性條件下，2個(gè)對(duì)映體一般具有相同理化性質(zhì)( 熔點(diǎn)、溶解度) 、紅外光譜、核磁共振譜和色譜保留行為，這也給結(jié)構(gòu)確證帶來(lái)一定的難度。手性藥物結(jié)構(gòu)確證的總體原則是確證各手性中心的絕對(duì)構(gòu)型是Ｒ 還是S。構(gòu)型的確證方法主要分為直接法與間接法兩大類，如單晶X 射線衍射法就屬于直接法，該方法能直接確證手性中心的構(gòu)型，不需要其他的輔助方法。但是，并非所有的手性藥物均適合采用直接法確證構(gòu)型，如某些手性藥物的單晶難以培養(yǎng)，或者僅靠分析待測(cè)物無(wú)法準(zhǔn)確確證構(gòu)型，這時(shí)就可采用間接法進(jìn)行構(gòu)型確證，如與其他異構(gòu)體的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析。對(duì)于復(fù)雜的多手性中心藥物，也可采用化學(xué)相關(guān)法佐證構(gòu)型確證，即通過(guò)分析起始物料的構(gòu)型、化學(xué)合成方法的立體選擇性及中間體的構(gòu)型控制等間接獲得終產(chǎn)品的構(gòu)型信息。其他常用的間接法還有比旋度、手性色譜、核磁共振以及旋光光譜、圓二色譜等。上述手性藥物結(jié)構(gòu)確證的方法及原則同樣適用于手性雜質(zhì)對(duì)照品，同時(shí)還應(yīng)該注意: 一般2 個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的核磁共振圖譜中有重疊，圖譜解析難度大，為準(zhǔn)確確證構(gòu)型，最好獲得純度較高的單一異構(gòu)體進(jìn)行構(gòu)型確證研究; 對(duì)多手性中心異構(gòu)體雜質(zhì)進(jìn)行構(gòu)型確證難度較大，應(yīng)注意在主成分構(gòu)型確證研究基礎(chǔ)上，善用間接法，對(duì)多種檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析和詳細(xì)的確證解析，以便準(zhǔn)確確證構(gòu)型，進(jìn)而為后續(xù)方法學(xué)驗(yàn)證的準(zhǔn)確性打下基礎(chǔ)。上述控制策略的實(shí)施，需要有效的分析方法的支持，因此，在生產(chǎn)過(guò)程各步驟建立合理的起始物料、中間體和終產(chǎn)品的分析方法，擬定合理的限度，也是控制的關(guān)鍵。光學(xué)純度分析方法的篩選同其他雜質(zhì)分析方法的選擇原則基本一致，應(yīng)關(guān)注方法的專屬性、靈敏度及準(zhǔn)確性。通常而言，光學(xué)純度分析方法除比旋度外，一般多采用手性分離色譜法，如HPLC、GC、毛細(xì)管電泳法( CE) 等。比旋度測(cè)定時(shí)影響因素較多，該法的靈敏度和準(zhǔn)確度均不高，通常僅采用比旋度作為光學(xué)純度的輔助質(zhì)控指標(biāo)。要準(zhǔn)確、有效地控制產(chǎn)品的光學(xué)純度，還要選擇立體專屬性更強(qiáng)、靈敏度更高的手性分離色譜法。目前隨著手性色譜柱的商業(yè)化發(fā)展，更易獲得，且該色譜系統(tǒng)穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和可操作性均良好，故在手性藥物的研究中應(yīng)用較多。同時(shí)，手性流動(dòng)相法、手性試劑衍生化法也有一定的應(yīng)用。手性分析方法篩選時(shí)應(yīng)關(guān)注以下問(wèn)題:① 首先應(yīng)結(jié)合制備工藝過(guò)程，分析手性中心引入方式、化學(xué)反應(yīng)的立體選性等確定要檢測(cè)的立體異構(gòu)體。理論上講非對(duì)映異構(gòu)體可以通過(guò)普通色譜法進(jìn)行分離檢測(cè)，只有對(duì)映異構(gòu)體才需要選擇立體專屬性的手性色譜法。如替格瑞洛中非對(duì)映異構(gòu)體1 /2 /3 可考慮在有關(guān)物質(zhì)分析方法中控制。② 結(jié)合對(duì)映異構(gòu)體的自身結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，如極性大小、紫外吸收強(qiáng)弱、衍生化反應(yīng)的活性基團(tuán)( 如氨基、醇基) 等，綜合考慮采用GC 法還是HPLC 法，手性固定相法、手性流動(dòng)相法、手性試劑衍生化法等。如替格瑞洛的起始物料S1 無(wú)紫外吸收，可先進(jìn)行柱前衍生化生產(chǎn)具有紫外吸收的對(duì)映異構(gòu)體，然后再采用手性固定相法進(jìn)行檢測(cè)。③ 手性試劑衍生化法需要供試品的化學(xué)轉(zhuǎn)化和分離等預(yù)處理過(guò)程，有時(shí)可引起某一對(duì)映體組分的消旋化、損失或富集，且手性衍生化試劑的光學(xué)純度及衍生化反應(yīng)的條件、收率等都會(huì)影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，分析方法篩選時(shí)應(yīng)進(jìn)行關(guān)注。多手性中心藥物的光學(xué)純度控制是源頭、過(guò)程及終產(chǎn)品控制一系列相輔相成的控制方法的綜合，其前提是各個(gè)階段的分析方法都能滿足準(zhǔn)確性要求［19］。如果起始物料中異構(gòu)體分析方法僅進(jìn)行專屬性、檢測(cè)限和定量限驗(yàn)證，則無(wú)法保證方法的準(zhǔn)確度，因此無(wú)論是起始物料、中間體，還是終產(chǎn)品的光學(xué)純度分析方法均應(yīng)參照分析方法驗(yàn)證的技術(shù)指導(dǎo)原則進(jìn)行全面的驗(yàn)證，其中立體專屬性是考察重點(diǎn)，除考察多個(gè)異構(gòu)體間分離度，還應(yīng)考察其他有關(guān)物質(zhì)( 中間體、反應(yīng)副產(chǎn)物等) 及強(qiáng)制降解產(chǎn)物( 酸、堿、光、熱、氧化等) 對(duì)異構(gòu)體檢測(cè)的影響。如果可能，盡量使用單一的異構(gòu)體對(duì)照品而非消旋體或者異構(gòu)體混合物進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，以確保檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性。在《手性藥物質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的在《手性藥物質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的指導(dǎo)下，本文以替格瑞洛為例，討論了多手性中心藥物的手性雜質(zhì)的控制思路。對(duì)于多手性中心的原料藥，應(yīng)在對(duì)制備工藝、反應(yīng)機(jī)理及穩(wěn)定性等充分研究的基礎(chǔ)上，根據(jù)手性中心的個(gè)數(shù)、引入方式等不同，綜合考慮采用過(guò)程控制和終產(chǎn)品控制相結(jié)合的控制策略，同時(shí)根據(jù)手性雜質(zhì)的安全性、雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則等擬定合理的限度，有效地控制原料藥的光學(xué)純度。相應(yīng)的制劑中，則根據(jù)制劑過(guò)程、貯運(yùn)過(guò)程中手性藥物構(gòu)型穩(wěn)定性研究結(jié)果，酌情增訂鑒別或立體異構(gòu)體的檢查項(xiàng)目。詳見(jiàn) 中國(guó)新藥雜志2020 年 第29卷第17期本站發(fā)布的文章均為促進(jìn)制藥界同行的交流與學(xué)習(xí)；未用于任何商業(yè)用途。我們尊重原創(chuàng)作品。選取的文章已明確注明來(lái)源和作者，版權(quán)歸原作者所有，如涉及侵權(quán)或其他問(wèn)題，請(qǐng)聯(lián)系我們進(jìn)行刪除。
