選柱子的依據(jù)是什么?
這里有一個進樣公式，即：J =Z×0.208%×N
1）進樣量用漢語拼音的J來表示；Z為硅膠裝填量
2）擬將ΔRf的差值精確到0.01，那么0.01的差值設置為1個單位，用N來表示；
3）進樣系數(shù)：0.208%，是基于40-60um粒徑（300-400目），60A孔徑的硅膠，在特定的壓力條件、理想流速下，計算出的理想進樣系數(shù)?？紤]到實際使用過程中樣品裝樣不平、操作誤差大等因素，以0.2%代替，更接近于實際；
舉個例子：80g的柱子在如下條件中可分離多少樣品？
薄層數(shù)據(jù)：Rf1=0.19，Rf2=0.33
則N=（0.33-0.19）÷0.01=14
按公式計算，J=80×0.2%×14=2.24g，則，該樣品依照此薄層數(shù)據(jù)，80g柱子最大進樣量為2.24g。
再來一個例子算算看。
薄層數(shù)據(jù)：Rf1=0.25，Rf2=0.21，120g的柱子能分多少樣品？
N=（0.25-0.21）÷0.01=4
進樣量J=120×0.2%×4=0.96g
不難看出，ΔRf差值越小，進樣量就越少。我們應根據(jù)目標物與雜質(zhì)的分離度（ΔRf的差值）來選擇使用何種規(guī)格的柱子。
該進樣公式可優(yōu)化為：J=Z×0.2×ΔRf，
即：進樣量=硅膠量（實際克數(shù)）×0.2×Rf的差值
用什么方法分離?
選好了合適的柱子，那么，該怎么設定分離方法呢？這里有一個非常經(jīng)典的方法。
線性梯度法：
初始溶劑比例=（薄層跑板的比例÷4）
最終溶劑比例=（薄層跑板的比例×2）
第一部分：初始比例，走1柱體積
第二部分：從初始比例線性漸增至最終比例，走11個柱體積
第三部分：最終比例，走2個柱體積。
如圖所示
例如：跑板的溶劑系統(tǒng)是石油醚：乙酸乙酯=4：1，即乙酸乙酯的含量是20%，那么走線性梯度的初始溶劑比例為20%÷4=5%乙酸乙酯，走1個柱體積；然后從5%逐漸遞增到20%×2，即40%，這個漸增的過程共計11個柱體積；最后以40%的比例走兩個柱體積，結束，共計14個柱體積！
注意：這個方法對泵的精度要求很高，溶劑調(diào)節(jié)比例的準確度在1%以內(nèi)。如biotage公司的isolera one；isco公司的RF200均可達到要求。如果您用的是國產(chǎn)的設備，或者精度比較差的設備（如isolera prime、RF75等），請將此方法的最終溶劑比例調(diào)節(jié)為：薄層跑板的比例×1.5，其他條件不變。
實驗人員可以根據(jù)自己樣品及過柱情況來增加或減少實際過柱柱體積數(shù)。
特別需要說明的是：根據(jù)薄層板數(shù)據(jù)建立的這個方法的前提條件是：爬板溶劑比例應能將目標物的Rf值落在0.1-0.4之間！！
理論進樣量表
進樣量的單位是g
來源：小木蟲
