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為了系統(tǒng)準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)桉葉多酚提取物抗氧化活性，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東省功能食品活性物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省天然活性物工程技術(shù)研究中心的李 偉、葉嘉宜、曹 庸*等人采用傳統(tǒng)的化學(xué)評(píng)價(jià)方法，并建立氧化損傷RAW264.7巨噬細(xì)胞模型，結(jié)合秀麗隱桿線(xiàn)蟲(chóng)（以下簡(jiǎn)稱(chēng)線(xiàn)蟲(chóng)）模型，全面評(píng)價(jià)純化后桉葉多酚抗氧化能力，為桉葉多酚提取物開(kāi)發(fā)成功能性食品或食品抗氧化劑提供理論依據(jù)。

由圖2A可知，桉葉多酚提取物和抗壞血酸的DPPH自由基清除率隨著質(zhì)量濃度增大呈劑量依賴(lài)性增大；桉葉多酚提取物和抗壞血酸半抑制質(zhì)量濃度（IC₅₀）分別為0.06 mg/mL和0.021 mg/mL。當(dāng)桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL時(shí)，最大清除率為（93.09±5.38）%，這也說(shuō)明桉葉多酚提取物在一定質(zhì)量濃度時(shí)具有良好的DPPH自由基清除能力，此時(shí)與抗壞血酸無(wú)明顯差異。桉葉多酚提取物的清除機(jī)理可能是多酚中具有多種供氫體，能將DPPH自由基還原成黃色的DPPH—H；隨著桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度增高，供氫能力增強(qiáng)，表現(xiàn)出高效的DPPH自由基清除率和更低的IC₅₀。

由圖2B可知，隨著樣品質(zhì)量濃度增大，桉葉多酚提取物和抗壞血酸ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力逐漸增強(qiáng)；其中抗壞血酸大于0.1 mg/mL時(shí)清除率達(dá)到平穩(wěn)期，IC₅₀為0.016 mg/mL，而桉葉多酚提取物IC₅₀為0.052 mg/mL。清除ABTS陽(yáng)離子自由基的原理與清除DPPH自由基不同，主要是電子轉(zhuǎn)移的過(guò)程；ABTS也更容易反應(yīng)，因?yàn)樗扔H水也親脂。

由圖2C可知，本實(shí)驗(yàn)采用鄰苯三酚自氧化法測(cè)定桉葉多酚提取物超氧陰離子自由基清除能力，清除效果呈量效關(guān)系，多酚含量越高，清除能力越強(qiáng)；桉葉多酚提取物IC₅₀為0.056 mg/mL，而抗壞血酸為0.025 mg/mL。當(dāng)桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL，清除超氧陰離子自由基能力與抗壞血酸無(wú)明顯差異。

由圖3可見(jiàn)，相比于對(duì)照組，當(dāng)桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度在12.5～100 μg/mL時(shí)，細(xì)胞活性均高于90%，且在12.5～50 μg/mL范圍內(nèi)具有一定促進(jìn)細(xì)胞增殖的效果；當(dāng)桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度在200～800 μg/mL時(shí)，細(xì)胞活性受到顯著抑制（P＜0.05）。因此選擇12.5、25、50 μg/mL作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度。

由圖4可見(jiàn)，模型組細(xì)胞存活率極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），此時(shí)細(xì)胞活性為（51.67±9.77）%，說(shuō)明造模成功。此外，桉葉多酚提取物處理組細(xì)胞活性隨質(zhì)量濃度增大呈上升趨勢(shì)，其中25 μg/mL和50 μg/mL桉葉多酚提取物組細(xì)胞活性分別顯著高于模型組27.94%和37.66%（P＜0.05，P＜0.01）；這說(shuō)明桉葉多酚提取物具有良好的抗氧化效果，能減輕細(xì)胞氧化損傷，有效保護(hù)細(xì)胞。

桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度篩選

圖6A表明，隨著桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度增大，線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)ROS積累量逐漸降低；相比于對(duì)照組，當(dāng)桉葉多酚提取物質(zhì)量濃度為100 μg/mL和200 μg/mL時(shí)，ROS積累量分別下降24.61%和30.48%（P＜0.05）。此時(shí)，兩個(gè)質(zhì)量濃度桉葉多酚提取物組間無(wú)顯著差異（P＞0.05），因此選用100 μg/mL開(kāi)展后續(xù)實(shí)驗(yàn)。為了進(jìn)一步研究桉葉多酚提取物在線(xiàn)蟲(chóng)氧化應(yīng)激狀態(tài)下是否起作用，實(shí)驗(yàn)將同期化后的線(xiàn)蟲(chóng)（100 μg/mL桉葉多酚提取物培養(yǎng)96 h）在1 mmol/L H₂O₂下刺激24 h，測(cè)定線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)ROS積累量。如圖6B所示，H₂O₂處理組線(xiàn)蟲(chóng)ROS積累量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），說(shuō)明H₂O₂處理后線(xiàn)蟲(chóng)發(fā)生氧化損傷；而桉葉多酚提取物處理后的線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)ROS積累量極顯著下降29.97%。

由圖7可知，相比于對(duì)照組，桉葉多酚提取物組線(xiàn)蟲(chóng)生存曲線(xiàn)發(fā)生高度顯著右移（P＜0.01），說(shuō)明桉葉多酚提取物處理后線(xiàn)蟲(chóng)整體壽命高于對(duì)照組。表1顯示桉葉多酚提取物組線(xiàn)蟲(chóng)最長(zhǎng)壽命和中位壽命均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），分別提高14.12%和14.03%。推測(cè)桉葉多酚提取物良好的抗氧化活性間接起到延長(zhǎng)線(xiàn)蟲(chóng)壽命的作用。