在分離純化的過程中，相信大家都會(huì)遇到極性很接近的樣品，對(duì)于此類樣品一般解決辦法有很多如減少上樣量、降低流速以及改變流動(dòng)相的配比等，這些措施都能有效提升樣品的分離度。若上述方法也不能改善分離度還可通過增加柱長來解決，增加柱長可直接更換大規(guī)格的色譜柱或者同內(nèi)徑色譜柱串聯(lián)使用，當(dāng)實(shí)驗(yàn)過程中沒有大規(guī)格色譜柱時(shí)可選用同內(nèi)徑色譜柱串聯(lián)的方法，現(xiàn)提供一個(gè)相關(guān)案例說明色譜柱串聯(lián)的使用效果。
實(shí)驗(yàn)部分
1、樣品信息
待分離樣品是一種熒光染料類化合物，主要包含兩個(gè)成分A和B，且兩者極性極為接近（見圖1）。產(chǎn)品結(jié)構(gòu)式中含羧基，故需要添加適量的乙酸以降低產(chǎn)品拖尾的影響。
圖1.待分離反應(yīng)液點(diǎn)板圖
2、樣品制備
下表1為兩次樣品制備實(shí)驗(yàn)參數(shù)的對(duì)比。
表1.兩次分離過程的條件對(duì)比
待分離樣品用常規(guī)方法進(jìn)行過一次分離但效果并不理想，通過圖2可以看出A和B兩個(gè)組分沒有分離效果，最終通過點(diǎn)板確認(rèn)只有部分A和B組分純度達(dá)標(biāo)，收集到的餾分中大部分是A和B組分交叉，根據(jù)此次分離的結(jié)果，對(duì)分離條件做了相應(yīng)的優(yōu)化。
圖2.常規(guī)方式分離色譜圖
分析上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，調(diào)整相關(guān)實(shí)驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行二次實(shí)驗(yàn)，主要是將12g和25g標(biāo)準(zhǔn)型快速分離柱（預(yù)填優(yōu)質(zhì)正相硅膠，40-63 μm, 60 ?）串聯(lián)起來對(duì)樣品進(jìn)行分離純化如圖3所示，制備譜圖及純化后點(diǎn)板圖見圖4所示。
圖3.分離柱串聯(lián)示意圖
圖4.優(yōu)化后的分離色譜圖和點(diǎn)板圖
根據(jù)圖3可看出將2根色譜柱串聯(lián)后在分離過程中產(chǎn)品在柱子中有明顯的色帶，根據(jù)圖4可以很明顯的看到兩個(gè)組分完全基線分離，且通過TLC點(diǎn)板的初步鑒定，A和B組分純度均合格。
結(jié)果與討論
通過兩次實(shí)驗(yàn)對(duì)比，我們可以發(fā)現(xiàn)將兩根色譜柱串聯(lián)后簡單快速的增加了柱長且能達(dá)到很好的分離效果。為了更好的分離樣品，實(shí)驗(yàn)過程中也對(duì)其他參數(shù)進(jìn)行細(xì)微調(diào)整（表1），主要如下：
1. 降低產(chǎn)品上樣量，將上樣量由2g降到1.5g；
2. 改變流動(dòng)相的配比，將甲醇的最高比例由10%降到5%左右；
3. 降低流速，由30 mL/min降到20 mL/min。
當(dāng)然，色譜柱串聯(lián)使用也具有一些缺點(diǎn)，對(duì)于溶解性較差的樣品并不適用，會(huì)導(dǎo)致此類樣品在分離過程中更易析出。
來源：常州三泰科技有限公司
