給大家推薦一篇發(fā)表在JACS上的文章，High-Throughput Covalent Modifier Screening with Acoustic Ejection Mass Spectrometry。文章的通訊作者是來自Merck公司的Xiujuan Wen博士和來自SCIEX公司的Chang Liu博士。
靶向共價方法具有解決“不可成藥”淺結合位點和優(yōu)化具有挑戰(zhàn)性的蛋白靶標(如KRAS)的藥物設計的潛力。高通量篩選目標蛋白的共價配體對共價藥物開發(fā)具有重要意義。液相色譜(LC)耦合電噴霧電離質譜(ESI-MS)鑒定一直是共價藥物發(fā)現(xiàn)的首選方法，但耗時的色譜分離(每個樣品4 - 5分鐘)限制了分析通量和文庫大小。而MALDI結合飛行時間質譜方法則主要應用于單電荷離子表征中，很難對大分子量蛋白上的小分子修飾進行指認。本文作者利用高分辨聲噴射質譜(HR-AEMS)，實現(xiàn)了對目標蛋白共價配體的高通量篩選。該技術采用聲學液滴噴射模塊，以非接觸方式將納升級樣品從384或1536孔板噴射到開口接口中用于后續(xù)質譜分析。利用該技術不需要復雜后處理就可以進行質譜表征，通過識別未修飾蛋白和修飾蛋白間的分子量差異對共價化合物的標記能力進行區(qū)分，從而能快速進行化合物對目標蛋白共價標記能力的篩選，每個化合物用時在1s左右。基于此技術，作者針對 Werner 綜合征解旋酶(WRN)進行了快速篩選，從10000余個化合物中篩選到了207個化合物可以對該酶進行有效的共價修飾。隨后通過LC-MS和酶活分析對篩到的化合物進行了驗證。該方法鑒定到的化合物酶活實驗陽性率在75%，與LC-MS系統(tǒng)相比其假陽性或假陰性風險均較低。綜上，本文利用高分辨聲噴射質譜建立了針對WRN蛋白的共價配體快速篩選方法，與傳統(tǒng)LC-MS方法相比大幅度提高了鑒定通量并維持了較高的鑒定準確性。原文鏈接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jacs.4c02377文章引用：DOI：10.1021/jacs.4c02377
