介紹一篇發(fā)表在JACS上的文章，題目為Photoaffinity Labeling Reveals a Role for the Unusual Triply Acylated Phospholipid N-Acylphosphatidylethanolamine in Lactate Homeostasis。通訊作者是來自康奈爾大學(xué)的Jeremy M. Baskin，他們課題組的研究方向是脂質(zhì)與膜相關(guān)的化學(xué)生物學(xué)。
N-?；字Ｒ掖及罚∟APE）是構(gòu)成真核生物膜的一種重要甘油脂質(zhì)，其在哺乳動(dòng)物心肌梗塞和缺血時(shí)積累，對(duì)其的主要研究是為了了解其在N-乙酰乙醇胺（NAE）生成中扮演的作用，但其本身的潛在生理功能很大程度上被忽視了，因此本文中作者希望使用光親和標(biāo)記的方法闡明其作為蛋白配體的潛在功能。
由于NAPE具有三個(gè)脂?；?，且會(huì)在內(nèi)源條件下分解成NAE，作者希望將富集用的生物正交基團(tuán)和光激活探針分別放在不同的脂?；?，從而避免了鑒定到NAE的互作蛋白。之后在HeLa細(xì)胞中測(cè)試了富集的蛋白，在三次重復(fù)中發(fā)現(xiàn)了30個(gè)蛋白至少可以在兩個(gè)重復(fù)中鑒定到。作者注意到了兩種細(xì)胞表面蛋白CD147和CD44，這兩種蛋白都可以在誘導(dǎo)NAPE合成酶大量表達(dá)（DOX用于誘導(dǎo)表達(dá)）并抑制NAPE代謝條件（LEI-401用于抑制NAPE-PLD降解）下減低光親和探針的標(biāo)記信號(hào)，表明天然NAPE可以結(jié)合這兩種蛋白。
CD147蛋白伴侶，促進(jìn)質(zhì)膜上 SLC16A 家族的單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（特別是 MCT1 和 MCT4）的運(yùn)輸和激活，此外，CD44還充當(dāng)MCT的附加伴侶，因此作者猜測(cè)NAPE對(duì)于這兩種蛋白的結(jié)合可以介導(dǎo)乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)。作者分別收集了對(duì)照細(xì)胞和NAPE水平急劇升高的細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞裂解物，結(jié)果表明NAPE的升高使得細(xì)胞外乳酸/細(xì)胞內(nèi)乳酸的比例上升了29%，表明NAPE加速了乳酸輸出，而CD147和CD44的組合敲低細(xì)胞系觀察不到類似的表型，從而證明了NAPE調(diào)節(jié)乳酸外排的功能。結(jié)合這一代謝物在缺血時(shí)升高的現(xiàn)象，這可能揭示了缺氧細(xì)胞快速外排乳酸水平并恢復(fù)代謝穩(wěn)態(tài)的分子機(jī)制。
總之，本文作者使用了光親和標(biāo)記技術(shù)研究了一種微量的細(xì)胞代謝物NAPE的生理功能并揭示了其背后的分子生物學(xué)機(jī)理。
本文作者：LYC
責(zé)任編輯：MB
DOI：10.1021/jacs.5c03851
原文鏈接：https://doi.org/10.1021/jacs.5c03851
